裸鼠皮下成瘤模型怎么做？从细胞接种到肿瘤测量的完整实操指南

裸鼠皮下成瘤模型因构建周期短、操作相对简便、肿瘤体积便于动态测量，被广泛用于抗肿瘤药物筛选、肿瘤生物学机制研究和药效评价。但很多课题组在实际操作中会遇到成瘤率低、肿瘤生长差异大、局部感染或动物状态差等问题，导致实验周期延长、数据重复性下降。

一、模型适用场景

裸鼠皮下成瘤模型适合以下研究方向：

• 抗肿瘤药物体内药效评价

• 肿瘤细胞增殖与生长动力学研究

• 基因编辑后肿瘤细胞功能验证

• 生物标志物或靶向药物筛选

• 肿瘤发生发展机制初步验证

由于皮下位置表浅，肿瘤体积可直接测量，是体内肿瘤实验中最常用的初筛模型之一。

二、实验前准备

1. 细胞准备

细胞状态是决定成瘤成败的关键。建议选择：

• 对数生长期细胞

• 细胞活率较高

• 无污染、无支原体异常

• 传代次数不宜过高

• 接种前避免细胞过度密集或状态老化

部分肿瘤细胞系成瘤能力较弱，建议在正式实验前进行预实验，确认细胞成瘤活性。

2. 动物准备

常用免疫缺陷小鼠包括裸鼠等，具体动物品系、周龄、性别和动物数量需根据实验目的确定。动物实验应在合规动物设施内开展，并遵守机构动物伦理要求。

3. 试剂与器械

主要包括：

• 肿瘤细胞悬液

• 无菌 PBS 或专用重悬液

• 注射器

• 无菌操作器械

• 酒精棉球

• 游标卡尺或电子测量设备

三、细胞接种基本流程

1. 收集对数生长期肿瘤细胞，离心后重悬于无菌 PBS 或专用缓冲液中；

2. 调整细胞浓度，充分混匀细胞悬液，避免细胞团块；

3. 动物固定后，对注射部位进行消毒；

4. 将细胞悬液缓慢接种于裸鼠腋下或背部皮下；

5. 接种后观察动物状态，定期观察注射部位是否出现结节。

四、细胞接种数量怎么确定

细胞接种数量没有固定答案，需要结合细胞系特性调整。一般来说：

• 成瘤能力较强的细胞系：可使用较低接种量

• 成瘤能力较弱的细胞系：需要适当提高接种量

• 预实验中建议设置多个细胞数量梯度

• 接种体积也应控制在合理范围内，避免局部组织压力过大

建议正式实验前完成细胞接种量预实验，以确定既能稳定成瘤又不过度增加动物负担的条件。

五、肿瘤观察与测量

1. 观察周期

接种后应定期观察动物状态和注射部位。多数情况下，肿瘤结节会在接种后一段时间内逐渐显现，但不同细胞系差异较大。

2. 肿瘤体积测量

肿瘤出现后，可使用游标卡尺测量肿瘤长径和短径，并按常用公式计算体积：

肿瘤体积 = 长径 × 短径 ² / 2

测量时应注意：

• 同一观察者尽量保持一致测量手法

• 测量角度和力度尽量统一

• 避免压迫肿瘤导致体积测量偏低

• 记录动物编号、测量日期和肿瘤状态

六、常见失败原因与优化方向

七、实验设计建议

1. 每组设置足够动物数，减少个体差异影响；

2. 实验组与对照组应同时接种，避免批间差异；

3. 固定测量时间点，便于绘制肿瘤生长曲线；

4. 结合终点体重、一般状态和肿瘤重量进行综合评价；

5. 抗肿瘤药物干预实验应明确给药起点、给药方案和观察终点。

引录生物可提供裸鼠皮下成瘤、原位成瘤及肿瘤模型构建服务，支持肿瘤细胞接种、动态观察、肿瘤测量、动物给药与终点分析，助力肿瘤体内药效评价。