大鼠支气管上皮细胞为气道防御屏障,既是病原体靶细胞,也分泌多种炎症介质,可用于哮喘、慢阻肺、肺部感染等呼吸系统模型研究。
SD大鼠支气管上皮细胞原代分离培养鉴定
【培养】
上皮专用培养基;
【方法】
1、大鼠麻醉后,无菌条件下暴露气管和肺,截取气管组织,保留支气管;
2、环状软骨下方插管,生理盐水灌洗3次,下端在支气管末端处结扎,去除气管表面结缔组织,PBS清洗干净,然后灌入1%链酶蛋白酶,结扎气管分支处,置装有无血清培液的培养皿中保持湿润,4℃过夜(或0.25%胰酶4°消化过夜);
3、消化时间到后,用F12培养基冲洗支气管,再剪开支气管用细胞刷充分刷洗,收集培养皿中的刷洗液,1000r/5min离心洗涤收集细胞。
4、弃上清后完全培养液重悬37°培养,24h后细胞贴壁换液;
【鉴定】
免疫荧光鉴定阳性:角蛋白(CK 18);
阴性:Vimentin;


