大鼠小胶质细胞

大鼠小胶质细胞

【材料】

1）器械灭菌：

手术器械： 2把眼科直剪，2把弯镊、2支左右1.5mL离心管、6cm或10cm Dish；

2）溶液准备：

DMEM/F12培养基、双抗PBS、75%的酒精、FBS、胰酶；

【方法】

1）3只新生1～2d大鼠75%酒精消毒后， 无菌条件下开颅取出脑组织，放在提前预冷的D-Hanks液中剥离血管与脑膜并去除所有出血点，将皮质和海马移到呈有D-Hanks液的 15 mL 离心管中；

2）用 1 mL 移液枪轻轻吹打数下加入0.25%胰酶并轻轻吹打混匀，而后将离心管放入37℃中3min，待液体呈流水状，基终止消化；

3）终止后的液体通过70μm细胞筛过滤，收集过滤后的液体并1000 r/min，5 min离心；

4）DMEM/F12清洗2次后细胞种盘,24小时第一次换液，第5天再换液，培养第 8 天时，细胞明显分层生长，用10%FBS的DMEM/F12 培养基换液；

5）第9天，将培养基从培养瓶中移到离心管中放入培养箱中培养，再将新的10% FBS的DMEM/F12培养基注入培养瓶，置于37 ℃恒温摇床（200 r/min）震摇2 h，收集散落细胞，直接接种至培养瓶或孔板中，同时在原混合培养瓶中加入20%FBS 的DMEM/F12培养基继续培养5d后可收获第2批小胶质细胞；采用差速贴壁25 min后倒掉新孔板中的培养基，将提前准备好的第8天换液培养基离心后加入养瓶或孔板中，24h后全换液；

【培养】

DMEM/F12完全培养基

【鉴定】

免疫荧光：

阳性：Iba1