小鼠睾丸间质细胞

小鼠睾丸间质细胞的分离培养及鉴定

【材料】

小鼠、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗PBS、FBS、培养皿、15ml离心管、DMEM/F12，I型胶原酶，200目网筛；

【方法】

1）脱颈处死小鼠，取出两侧睾丸放入PBS中。

2）去除附睾和白膜，完整睾丸加入0.05%I型胶原酶，37℃水浴15min。

3）时间到后剧烈震摇，睾丸实质散开，分离精小管，终止消化，200目网筛过滤，收集滤液。

4）1000r/min，离心7min，收上清，沉淀加入DMEM/F12培养基，重复离心收上清，重复至上清清澈（最多5次）

5）percoll梯度分离纯化细胞，从管底依次60%、37%、26%、21%、细胞悬液，3000r/min，离心30min，收集中间悬浮细胞层，DMEM/F12培养基稀释，1000r/min，离心7min，细胞贴壁培养。

【培养】

DMEM/F12培养基+10%FBS+双抗;