大鼠膀胱平滑肌细胞

大鼠膀胱平滑肌细胞分离培养及鉴定

【简介】

       平滑肌是许多疾病中的共同路径，因此，了解在疾病发生及持续过程中平滑肌怎样变化，这是治疗方法取得进展的重要一步。膀胱壁由三层组织组成，由内向外为粘膜层，肌层和外膜。逼尿肌为膀胱壁层肌肉的总称，由平滑肌构成。分为三层，内、外层为纵行肌，中层为环形肌。环状肌最厚，坚强有力。逼尿肌收缩，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。体外培养膀胱平滑肌细胞不仅为组织工程膀胱、尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基础与前提。

【材料】

大鼠、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗PBS、FBS、培养皿、15ml离心管、DMEM/F12、I型胶原酶、胰酶；

【方法】

1）将大鼠麻醉处死，迅速取出膀胱组织放于预冷HankeS液中，冲洗 2～3次；2）将内膜和基质去除干净的膀胱平滑肌条剪碎至lmm，用0.1%I型胶原酶和0.1%胰酶混合消化液37℃水浴震荡消化45min；

3）加入含10%FBS的DMEM/F12培养液终止消化，吹打，200目细胞筛过滤吸取悬液，再通过200目细胞筛，收集滤液1000rpm，离心5min；

4）去上清，沉淀DMEM/F12培养基重悬，10001000rpm，离心4min，去上清，重复离心2次，沉淀加入培液重悬，种盘。

【培养】

DMEM/F12+15%FBS+1%双抗；

【鉴定】

免疫荧光

阳性：α-SMA、Desmin

阴性：vimentin