外泌体抽提试剂

外泌体纯化试剂

产品描述

外泌体是由活细胞分泌的直径为30-150nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构，存在于 细胞培养上清、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其他生物体液中；所有的真核细胞类型，包 括造血细胞、上皮细胞、神经细胞、干细胞、脂肪细胞和癌症细胞均可在培养条件下分泌外泌体。外泌体膜上有脂质筏限制膜流动，携带有多种蛋白质、脂类、核酸（包括miRNA、DNA、lncRNA、 mRNA）等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾 病的早期诊断标志物，包括肿瘤、心血管疾病和神经退行性疾病等等。除此之外，外泌体也被称为“天然的纳米粒子”用来进行基因和药物递送的载体。外泌体独特的结构以及临床应用的良好前景，使得外泌体成了人们研究的热点。

外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件 要求高、操作难度大。我们的外泌体提取试剂盒包括从细胞培养上清、血清、血浆、尿液等多种来源的提取试剂盒类型。我们的试剂盒的原理是基于聚合物沉淀法，但是我们增加了外泌体的纯化步骤，将其中残存的聚合物残留显著降低，大大提高了外泌体的纯度。与进口以及国内类似产品相比，我们将提取的外泌体进行了电镜分析、NTA粒径分析、Western blot、qPCR等多种检测，

外泌体的完整性、粒径的均一性、表面标记物的表达等方面都达到了很好的效果。

自备材料

1、低温高速离心机（10000 g离心力），涡旋震荡器；2ml离心转子；1.5ml离心管；

2、1xPBS缓冲液（无菌）；

操作规程

一、样品预处理

1、取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于室温解冻，将完全融化后的样品置于冰上；

2、预冷离心机和1xPBS溶液

3、样品初始用量：（单次提取时的样品量）

4、离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于4℃以3000 g离心10 min,去除样品中的细胞碎片；

5、上清液转移：去除细胞碎片的离心上清液转移到新的离心管中；

6、离心去杂质：转移后的上清液于4℃以9500 g离心10 min，去除样品中杂质，将离心后的上清

液转移至新的离心管中。

注：若沉淀较多，可重复步骤6多次，每次取上清液至新的离心管直至无明显沉淀为止。

二、外泌体的提取

1、上清液预处理：用预冷的1xPBS将离心后得到的上清液按照以下比例进行稀释，再加入外泌体

沉淀试剂B；具体的加入剂量如下（注：其他剂量规格请根据表中的试剂用量等比例换算）

2、溶液混合：将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再放置于4℃静置至少2h或过夜。

3、离心：将离心管于4℃以9500 g离心60 min后，小心取出离心管并用记号笔标记沉淀在管壁的

位置，然后尽可能吸尽上清液，沉淀即为外泌体颗粒。

注：可将离心管倒扣在吸水纸上减少上清液的残留,外泌体颗粒会出现在管壁一侧，从管口到管底的

一条狭长区域内，用笔做好标记。区域要标全，以免外泌体损失。

4、外泌体的溶解：取预冷的1xPBS均匀吹打管壁的离心沉淀物（具体加入剂量如下表），待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5mL离心管中；

注：其他剂量请根据表中的试剂用量等比例换算

5、除杂：将上述离心管再次以12000 g离心2 min，保留上清液，该上清液中含外泌体颗粒。

三、外泌体纯化

1、纯化：将收获的外泌体上清液转入外泌体纯化柱上室中，4℃，3000 g离心10 min，离心后收集管底的液体，此液体中富含纯化后的外泌体颗粒；

注：外泌体纯化柱不可重复使用

2、保存：纯化后的外泌体以50-100ul进行分装，保存于 -80℃低温冰箱中，以备后继实验使用。

储存条件及注意事项

本品在室温可稳定保存24个月，使用前请充分混匀。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！