流式

                                                                                              流式

流式细胞仪实验方法及常见问题分析

流式细胞仪(Flow Cytometer)是集多种技术为一体的新型高科技仪器。

液流系统

光学系统电子系统

流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段，对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒同时进行多参数定量分析和分选的高新技术。

研究对象:各种细胞、微生物、人工合成微球等。

中心实验室的流式能做什么?

·流式实验需要做哪些准备和工作?

流式细胞仪检测范围

FCM 实验流程

1.单细胞标本的制备

2.标记荧光抗体

3.检测

4.数据分析

一、单细胞标本的制备(关键步骤)

6种标本来源

①外周血单细胞悬液制备

新鲜的外周血是天然的单细胞悬液，需要用红细胞裂解液裂解RBC。

②脱落细胞的单细胞悬液制备

③脱落细胞的单细胞悬液制备

脱落细胞应去除取材伴随的杂质后再制备细胞悬液。

对临床诊断和治疗很有意义，比如脱落的肺泡细胞。

④新鲜实体组织单细胞悬液制备

常用方法:酶消化法、机械法、化学处理法、表面活性剂处理法等。

不论哪种方法都不可避免会对细胞表面膜结构、细胞活性和功能造成不同程度的损伤。

⑤活检标本单细胞悬液制备

方法:与新鲜实体组织基本相同，要求镜检取材标本至少取3块以上。

⑥石蜡包埋组织单细胞悬液制备

常用方法:二甲苯脱蜡法、组织清洁剂脱蜡法、甲氧-双氧水处理法。

扩大了流式的应用范围，有利于进行临床回顾性研究。

评判单细胞悬液制备的标准

1.细胞团块、碎片尽可能少，不能出现肉眼可见的团块，上机前细胞必须过300目滤膜。

2. 细胞呈单个分散状态。

3. 细胞浓度:5x105~1x106

4. 分散过程中细胞的活性不受到明显的损害，以保证下一步的荧光染色处理。

样品制备过程中常见的问题及解决对策